产品描述：

microRNA (miRNA) 是一种长约18~25个核苷酸的非编码RNA，对基因的表达调控发挥着重要的作用。对于miRNA的实时定量PCR与以往的PCR有些不同，这主要是因为miRNA的自身结构比较特殊，其最大的特点就是长度过于短小，仅仅二十几个碱基的核酸片段无法直接应用常规的PCR技术扩增。所以，在针对miRNA的PCR技术中，必须要延长待测miRNA的长度，构建出一个足够长的PCR模板，才能进一步应用PCR技术来定量分析。本试剂盒采用加A法来进行miRNA第一链cDNA的反转录。具体过程是先通过E.coli Poly(A) Polymerase在miRNA3' 末端加多聚A尾Poly(A)，再使用Oligo(dT)-UniversalTag通用逆转录引物进行逆转录反应，最终生成miRNA对应的cDNA第一链。microRNA逆转录第一链合成试剂盒采用了双组分形式，简化了实验操作流程，降低了操作失误的可能性。本产品中的miRNA RT Enzyme Mix包含了E.coli Poly(A)Polymerase和RTase。其中的E.coliPoly(A) Polymerase不但具有高效的加A尾效率，还可特异性识别单链miRNA，从而避免了具有双链结构的miRNA前体的进一步逆转录反应；RTase经过分子改造，去掉了RNase H活性，增加了RNA模板亲和力，从而使得miRNA的逆转录反应具有更高的效率和灵敏度。本产品中的2× miRNA RT Reaction Buffer包含了miRNA加A尾反应和逆转录反应的所有原料和引物，并经过精心优化，可保证miRNA 3' 末端的Poly(A) 修饰过程和逆转录过程同时高效进行。模板总RNA的使用范围可达5 pg~4 μg（质量范围）。

注意事项：

1. 本试剂盒能给所有单链 RNA 加尾并进行第一链 cDNA 合成，如需高效获得研究的 microRNA 第一链 cDNA，可选择 Small RNA (≤200nt) 提取试剂盒提取纯化 Small RNA 再进行加尾和第一链 cDNA 合成；

2. 本试剂盒含有 RNaseInhibitor，操作过程中仍应注意预防

RNase 污染。经常更换新手套，使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。

产品组成：

注意：

1. 下游 qPCR 检测用户需根据自身具体研究对象合成 miRNA-specific 5'

primer；

2. qPCR Mix 推荐使用 Monad 化学染料法定量 PCR 预混液（独立

ROX）（货号 MQ00401）；

3. 用户可根据自身需求设计研究物种内参引物；

人 U6 参考引物如下：

Hsa-U6-Forward Primer: CTCGCTTCGGCAGCACA

Hsa-U6-Reverse Primer: AACGCTTCACGAATTTGCGT

• MR05301-miRNA 第一链 cDNA 合成试剂盒（加尾法） -说明书（V1)

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